产品简介:

MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay）被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂 (如DMSO)存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
操作步骤（仅供参考）：
1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞（悬浮细胞无需消化）。
2、低速离心，收集细胞沉淀。
3、用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4、细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000-10000个/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5、37℃ 5% CO₂继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6-24h。
6、按照实验具体要求，给予0-20μL干预药物处理，37℃ 5% CO₂继续培养至合适时间。
7、弃培养液，每孔加入10μL MTT溶液和90μL新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育4h。
8、弃培养液，每孔加入110μL DMSO，置摇床上低速震荡10min，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。
9、在酶标仪570nm测定各孔吸光度。若读数超出最大范围，可改用OD490测定各孔吸光值。
注意事项:

1. 由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加 PBS，水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
2. MTT 溶液为黄色需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。
3. MTT溶液在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20-25℃水浴至全部融解后使用。
4. Formazan 溶解液结冻或产生沉淀时可以 37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5. MTT溶液在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20-25℃水浴至全部融解后使用。
6. 培养细胞时尽量避免细菌污染。应注意设立OD 调零孔和对照。
7. 含酚红的培养基和盐溶液会使背景的吸光值增高，同时也会降低灵敏度。
8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。