快速内切酶HindIII
货号:RE008C-500 rxns 品牌:Biotopped
会员价:
300.00
¥300.00
北京:
哈尔滨:
沈阳:
广州:
中文名称 快速内切酶HindIII
存储条件 -20℃
保质期 2年
产品介绍:


产品说明

快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~ 15分钟内精确完成 DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒 DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。快速内切酶快速内切酶具有如下特点:5~ 15分钟内即可完成酶切;共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外,伊势久去磷酸化、连接试剂在 Reaction酶切Buffer中具有 100%活性,支持一管化反应,提升“酶切—修饰—连接”的体验。 
产品组成:

组分 /  规格

500Rxns

Storage

快速内切酶 HindIII

500 μl

-20℃

10× Reaction Buffer

1 ml ×2

-20℃

10× Reaction Color Buffer

1 ml ×2

-20℃

 建议反应条件  
1× Reaction 缓冲液; 37℃温育;参照“DNA  快速酶切流程配制反应体系。
 
失活条件:80℃  温育 20 min
 
基本信息:5'...A A G C T T...3' 3'...T T C G A A...5'
 
使用方法
1.DNA快速酶切流程
① 冰上按照下表配制反应体系

 

质粒 DNA

PCR  产物

基因组 DNA

ddH2O

15μl

16μl

30μl

10× Reaction Buffer  10× Reaction Color Buffer

2μl

3 μla

5μl

底物 DNA

2 μl (up to 1 μg)

10 μl (~0.2 μg)

10 μl (5 μg)

快速内切酶 HindIII

1μl

1μl

5μl

Total

20μl

30μl

50μl

 a.本体系适用于经过纯化的 PCR  产物酶切。未纯化的 PCR  产物具备一定的离子强度,10× Reaction Buffer加入量可适当减少至 2μl 。但由于 DNA  聚合酶同时具 有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR  产物进行纯化。② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀 (切勿涡旋) ,然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 37℃温育 15 min (质粒) ,或 15~30 min  (PCR产物) ,或 30~60min  (基因组DNA)
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应 (可选)
2. 双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为 1μl ,并根据需要适当扩大反应体系;
所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10
如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应 温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系

DNA

1 μg

2 μg

3 μg

4 μg

5 μg

快速内切酶 HindIII

1μl

2μl

3μl

4μl

5μl

10× Reaction Buffer  10× Reaction Color Buffer

2μl

2μl

3μl

4μl

5μl

Total

20μl

20μl

30μl

40μl

50μl

注:如果总反应体系大于 20μl ,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
质量控制

质控项目

质控标准

功能活性检测

最适反应温度下,在20μl反应体系中,1μl快速内切酶HindIII 能够在15 min内完全消化1μg λDNA

星号活性测试

最适反应温度下,将1μl快速内切酶 HindIII1μgλDNA  共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活 性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性

酶切连接再酶切检测

最适反应温度下,使用1μl快速内切酶 HindIII 消化底物,回收酶切产物。在22 ℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下,使用1μl快速内切酶 HindIII1μg超螺旋质粒DNA共同温育4 h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

蓝白斑检测

将含有单一 lacZα基因的载体以1μl HindIII消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应 抗生素、IPTGX-galLB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误 (DNA 末端切口不完整) 的产物将得到白色菌落。对于 Reaction 系列限制酶而言,白色菌落比例应小于 1%

 
不同DNA 中的酶切位点数量

DNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/ 19

Adeno2

6

0

1

1

1

6

1

12

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

无影响

无影响

无影响

无影响

序列可能重叠 剪切受阻

在不同反应缓冲液中的活性

BIOISCO

Thermo Scientific

NEB

Takara

Reaction Buffer

FastDigest Buffer

CutSmart® Buffer

uickCut™ Buffer

活性 100%

75%

100%

100%

注:活性数据来自BIOISCO限制酶标准反应体系下的检测。

 

 

定制产品:

博奥拓达源头厂家,规格齐全。从标准到特殊,博奥拓达定制服务,满足您的个性化需求!

鉴于定制产品的规格与功能是根据客户特定需求定制,其操作与维护方式亦有独特性。因此,不提供通用说明书。

 

注意:

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

 

备注:
以上数据均来自公开文献,博奥拓达暂未进行独立验证,仅供参考。
These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

暂无 质检报告(COA)!
  • 胃蛋白酶(来源于猪胃)
    25g Biotopped
    ¥1260.00
    ¥1260.00
  • 溶菌酶,食品级
    1kg Biotopped
    ¥650.00
    ¥650.00
  • Hiper SmaI
    1000U Biotopped
    ¥368.00
    ¥368.00
  • Mito-TEMPO
    5mg GC
    ¥495.00
    ¥495.00
暂无技术问答内容!
首页 0购物车